主營產(chǎn)品：
生化試劑，標(biāo)準(zhǔn)品,對照品，PCR試劑盒，?核酸檢測試劑盒，熒光定量檢測試劑盒，生化試劑盒?，比色法試劑盒，酶活性檢測試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免yi檢測試劑盒，試劑盒，ELISA試劑盒，抗體，重組蛋白，分光光度法檢測試劑盒，細(xì)胞株，原代細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基，標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)步驟
日期：2025-05-09 15:47
瀏覽次數(shù)：2
摘要：
逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcription），是以RNA為模板合成DNA的過程，合成的DNA稱為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄過程遺傳信息的流動方向?yàn)镽NA到DNA，與轉(zhuǎn)錄過程DNA到RNA的方向相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、試劑化凍后，用手輕彈混勻后短暫離心。
2、 基因組DNA（gDNA）去除：根據(jù)RNA樣品的濃度按10pg~1μg計(jì)算用量，在RNase-free離心管中依次加入RNase-free ddH2O，5×gDNA Wiper Mix 2μL，RNA樣品，總體系為10μL。用移...
逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcription），是以RNA為模板合成DNA的過程，合成的DNA稱為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄過程遺傳信息的流動方向?yàn)镽NA到DNA，與轉(zhuǎn)錄過程DNA到RNA的方向相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、試劑化凍后，用手輕彈混勻后短暫離心。
2、 基因組DNA（gDNA）去除：根據(jù)RNA樣品的濃度按10pg~1μg計(jì)算用量，在RNase-free離心管中依次加入RNase-free ddH2O，5×gDNA Wiper Mix 2μL，RNA樣品，總體系為10μL。用移液器吹打混勻后短暫離心。放入PCR儀，設(shè)置反應(yīng)條件為42℃ 2min。
3、第1鏈cDNA合成：根據(jù)上一步反應(yīng)管的數(shù)量按以下體系在RNase-free離心管中配制預(yù)混液：RNase-free ddH2O 5μL，逆轉(zhuǎn)錄引物（2μM）1μL，10×RT Mix 2μL，HiScript II Enzyme Mix 2μL，用移液器吹打混勻后短暫離心。在上一步得到的反應(yīng)管中每管加入10μL，用移液器吹打混勻后短暫離心。放入PCR儀，設(shè)置反應(yīng)條件為25℃ 5min，50℃ 15min，85℃ 5min。所得cDNA產(chǎn)物可立即用于qPCR反應(yīng)或-20℃保存。